بعد از جدا کردن سرم به مدت 16 دقیقه در 56 درجه سانتیگراد قرار داده و میزان inactivation سنجیده می شود.
ایزو انزیم های استخوان و روده 50 تا 70% و ایزو انزیم کبدی 90 تا 100% غیر فعال می شود ایزو انزیم های جفتی و Regan به حرارت مقاوم هستند.